atp酶染色的具体步骤与注意事项?

2015/3/31 12:54:59

你所描述的问题很可能是溶液的pH值的问题,染色的结果与pH密切相关,附区分骨骼肌纤维类型的ATP酶组织化学方法: 显示肌球蛋白的ATP,肌纤维I、II型。 1. 组织固定于10%~15%中性福尔马林。 2. 水洗后入0.88庶糖水溶液,或1%阿拉伯胶(100ml加30g庶糖)浸2~3d。 3. 冰冻切片10um,分别放入三种不同PH值的预孵育液内,室温下10min。PH分别为10.4、4.65和4.3(准确)。 4. 入巴比妥钠液(PH9.4)1min。 5. 入孵育液30min,37℃。 6. 2%氯化钴(用前配制)3min 7. 蒸馏水洗3次1min/次 8. 1%硫化胺(用时配制)10min 9. 流水冲洗不少于10min。 10. 各级酒精脱水、透明、封片。 预孵育液: 1. 巴比妥钠PH10.4,取巴比妥钠4.12g,氯化钠1.998g,加蒸馏水1000ml。 2. 醋酸缓冲液PH4.65,A液:醋酸钠13.5g加蒸馏水至500ml。B液:冰醋酸6ml蒸馏水至5

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你所描述的问题很可能是溶液的pH值的问题,染色的结果与pH密切相关,附区分骨骼肌纤维类型的ATP酶组织化学方法: 显示肌球蛋白的ATP,肌纤维I、II型。 1. 组织固定于10%~15%中性福尔马林。 2. 水洗后入0.88庶糖水溶液,或1%阿拉伯胶(100ml加30g庶糖)浸2~3d。 3. 冰冻切片10um,分别放入三种不同PH值的预孵育液内,室温下10min。PH分别为10.4、4.65和4.3(准确)。 4. 入巴比妥钠液(PH9.4)1min。 5. 入孵育液30min,37℃。 6. 2%氯化钴(用前配制)3min 7. 蒸馏水洗3次1min/次 8.

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1%硫化胺(用时配制)10min 9. 流水冲洗不少于10min。 10. 各级酒精脱水、透明、封片。 预孵育液: 1. 巴比妥钠PH10.4,取巴比妥钠4.12g,氯化钠1.998g,加蒸馏水1000ml。 2. 醋酸缓冲液PH4.65,A液:醋酸钠13.5g加蒸馏水至500ml。B液:冰醋酸6ml蒸馏水至500ml。取A液24ml,B液26ml混合至PH4.65。 3. 醋酸缓冲液PH4.3。用2液调PH至4.3。 孵育液: 取巴比妥钠液(PH9.4)10ml加三磷酸腺甘钠盐20mg。 结果: PH值 纤 维 类 型 I IIA IIB IIC 10.

4 灰或白 黑 黑 黑 4.65 黑 白 灰或黑 黑 4.3 黑 白 白或灰 深灰-----------------------------------------------巴比妥钠能影响Ca2+-ATPase活性,对实验最后一步硫化胺沉淀显色很重要。另外,蔗糖溶液是为了保持更好的渗透压,让细胞原始形状保持更好,PBS应该不如蔗糖好。

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